Purification de la superoxyde dismutase d'un isolat bactérien

Les cellules ont été récoltées à partir de l'isolat de culture bactérienne par centrifugation et ont été mises en suspension dans un tampon Tris-HCl de pH 8,0. La densité optique (D.O.) des cellules a été mesurée à 600 nm et chaque fois que des cellules de 21,5 densités optiques (D.O.) ont été perturbées et utilisées pour la purification de l'enzyme.Purification de la superoxyde dismutase de SPB-13.Laméthode de précipitation au sulfate d'ammonium a été utilisée pour concentrer les protéines.Ensuite, l'enzyme a été purifiée par une colonne de DEAE-Sepharose. La colonne DEAE-Sepharose a été chargée avec 3ml de protéine concentrée.L'activité enzymatique a été enregistrée uniquement dans les fractions 22, 23, 24, 25, 26, 27 et 28. Ces fractions ont été mélangées ensemble. La pureté des fractions mélangées et de l'enzyme brute a été vérifiée par SDS-PAGE.L'activité maximale de la superoxyde dismutase de SPB-13 a été trouvée dans le tampon Tris-HCl, 60mM molaire, pH 8.0, le temps d'incubation était de 2.0 minutes, la température d'incubation 450C. Une concentration d'enzyme de 10µg s'est avérée être optimale. La thermostabilité de la superoxyde dismutase a été vérifiée et l'enzyme s'est avérée être thermostable jusqu'à550Cpendant 60 minutes.